三、冬虫夏草和蝠蛾昆虫人工培育技術

　　(一)冬虫夏草茵的寄主昆虫飼養繁殖技術要進行冬虫夏草的人工培育，首先必須大量人工飼養寄主一一蝠蛾屬昆虫。蝠蛾一生中有98%的時間都在土壤內生活，僅有2.5一13d的成虫期營地面生活。所以，這類昆虫的人工飼養管理主要是在土壤中開展。

　　1.蝠蛾的飼養工具
　　(1)蝠蛾卵的飼養工具。飼養蝠蛾卵可用兩种方法，一是用直徑 15一20cm的玻璃培 養皿，墊上2一3層濾紙，皿內放一塊吸水棉保持濕度，每皿可飼養200一500粒卵。此法利于觀察，但難掌握濕度。二是用l0cm xX5一8cm的廣口瓶或者25cm x 30cm的玻璃飼養 缸，內置3一5cm厚的過篩細腐殖土，种上1一2棵珠芽寥植物，把卵放養于土表至lcm深的土層中，每瓶可飼養300一1000粒卵﹔飼養時只要掌握住植物不枯萎，即可不加濕度。此法卵的孵化率高，但觀察和移植幼虫對比較困難。
　　(2)幼虫的飼養工具有以下4种。
　　a.玻璃養虫缸﹕用18一25cmX30一35cm的玻璃缸，也可用標本浸泡缸，放置土壤15一25cm，种上幼虫取食的植物，把剛孵化幼虫移入缸內，每缸可飼養10一30頭幼虫。
　　b.地下養虫箱﹕箱一般高30一50cm，寬20一25cm，厚3一5cm。飼養箱骨架用鋼筋 焊成，上面鋼筋做成提手，便于提動﹔寬的兩面用3一5mm玻璃，便于觀察虫体活動﹔底 和兩個側面裝上16孔目的銅紗网，便于水分滲入。然后裝上土壤，种植飼料植物，每箱放養20 一50頭幼虫﹔在較堅實的地上挖一個比飼養箱体積稍大和深的槽，把養虫箱放入槽中，觀察時將養虫箱提出地面，抹去外表玻璃上的土壤，即可清楚看到幼虫活動情況。
　　c.大型養虫籠﹕在半自然的狀況下，選擇一塊排水好、土質疏松的場地，挖長12一l5m、寬2一3m、深4Ocm的深槽，底部和四周墊上尼龍紗网(最好用雙層，小虫不易鑽出)，再把疏松的腐殖土鏟進填平，种上幼虫食物，放入幼虫飼養，每平方米可放養30一50頭﹔該法有利于大規模飼養，但觀察困難。
　　d.用各類盆具裸露飼養﹕把植物飼料洗淨放入盆中，放入幼虫飼養，盆口覆蓋一層黑布或者黑紙遮光。此法利于生活史觀察，但要注意勤換飼料和清除糞便。
　　(3)蛹和成虫的飼養工具。制作長50cm、寬50cm、高55一60cm的養虫箱。底部用薄鐵板或雙層銅紗网封底﹔頂和四周用鐵紗或尼龍紗封蓋，前面可制成一道活動紗网門。在箱底放入10一20cm的土壤，种上植物，把蛹和成虫放養土中，此法可進行密植飼養。

　　2.飼養技術要點
　　(1)土壤的選擇。土壤是蝠蛾昆虫一生中最主要的活動場所。土壤條件是否适合該虫生活是人工飼養成活率高低的關鍵之一。最适宜蝠蛾生長的是高山草甸土﹔次之是流石灘和草甸混合土﹔再次之是高山棕色、暗棕色林土，其他土壤對此虫生長不良。
　　(2)食料的選擇。幼虫最喜取食圓穗蓼、珠芽蓼、黃　、小大黃等植物的嫩根芽。由于蝠蛾昆虫是一類雜食性昆虫，在無上述植物的地方，可用禾本科 (如青稞、麥、谷芽等)﹔十字花科、莎草科的嫩根飼養。在中、低海拔地區(适宜生活的溫度下)用土大黃、胡蘿卜、白蘿卜、白薯 (紅苕)、馬鈴薯、苹果等飼喂也能正常生長發育，最好為土大黃、胡蘿卜和白薯三類。
　　(3)溫、濕度的選擇。蝠蛾昆虫是一類耐低溫而怕高溫的昆虫。最适宜在15一19C中生活成長﹔此虫最适宜空气濕度75%一85%，土壤含水量40%一45%之間。

　　3.管理技術
　　(1)成虫期。成虫不取食任何食物，只要保持水分和适宜溫度即能正常成活和產卵。但蛾子栖息環境与產卵量有關。成虫最喜選擇有杜鵑和蝠蛾幼虫取食的蓼科等植物根旁產卵，所以在蛾子交配產卵前植上几株相關植物最佳﹔另外不能有強光影響。
　　(2)卵期。要使卵能正常孵化，一定要掌握好适宜的溫、濕度。
　　(3)幼虫期。幼虫由于生長期長，而且虫体壁薄而易破，飼養時一定要細心，除了必要的觀察、換土和換食料外，盡量減少翻動。幼虫的飼養關鍵是初孵的幼齡時期，初孵幼齡虫要給足細小鮮嫩、濕度不高的食物﹔土壤最好經過篩檢，以免粗硬物擦傷主体。此外，為了延長食料和土壤不霉坏，更換前用紫外燈照射殺菌l5min，土壤也可在陽光下暴晒1一2h后再用。
　　(4)蛹期。養蛹時，把養蛹器皿內的土壤壓實，然后用与蛹粗細的木棍人工造一土室，土室略斜，深約2一3cm，每室放一蛹，放蛹時，蛹頭向土表面，上用細土蓋住。蛹的溫濕度，可控制在大气濕度80%一85%，土壤含水量42一45%之間，溫度18一22℃之間。

　　(二)冬虫夏草菌的人工培養技術

　　要獲得純正的冬早夏草菌种必須進行人工的分离、純化、复壯、保存等工作。

　　1.分离冬虫夏草菌的技術与條件
　　(1)材料要求。獲得純的菌种對材料要求比較嚴格﹔一般來說如果是進行冬虫夏草的組織塊分离法，最佳的分离材料是每年的10月底至11月份，青藏高原高寒草甸土壤剛開始凍結時期采的材料，這個時期冬虫夏草菌剛感染蝠蛾幼虫進入僵虫期不長時間，嫩小的子座芽剛長出虫頭部0.2一0.5cm，虫体內其他雜菌較少，最易進行分离。如果是第二年5一6月份采的材料，僵虫体和子座上都有許多种雜菌共生或腐生，難獲得純菌种。若用子囊孢子進行分离培養，材料最好在每年的7月中、下旬子囊孢子剛有部分成熟期采集分离培養。
　　(2)操作方法。有以下3步。
　　a.僵虫体 (即菌核)的分离﹕分离前，用水刷洗干淨主体表面，再用無菌水清洗2一3次﹔用0.1%一0.2%的升汞溶液，對分离材料進行約3一5min的表面消毒﹔再用無菌水清洗。選取与胸足為界的前段部分。用解剖刀切去表皮，避開消化道，取血腔菌絲切成芝麻粒大小，壓入平板培養基中，每皿1一2粒。置于15一19℃中培養，待菌落長出0.2一0.5cm時，挑選少量菌絲反复在平板培養基上分純2一4 次，确定無其他雜菌后，移入試管保存和培養。
　　b.子座芽分离﹕從僵虫頭頂切下洗淨的子座芽，置入0.1%升汞液中消毒2一3min，用無菌水洗淨，切取中間部位組織塊壓入培養基中﹔培養條件同a。
　　c.子囊孢子分离﹕用透明紙袋套住子囊孢子成熟的子座，讓子囊孢子彈跳粘貼在紙袋上，然后，把有子囊孢子的紙袋浸入25%的葡萄糖液中，洗下孢子，放入15一19℃中培養，每天鏡檢，當袍子萌發時，用微吸管吸單個孢子滴于平板中培養﹔培養條件同a。也可把整個成熟的冬虫夏草帶回室內，用棉紙把僵虫和連虫体的子座包住，僅留出有孕部分，在無菌室中，橫放，下置一片載玻片，隨時保持主体濕度﹔每天鏡檢，當看到子囊孢子彈到玻片時，用微吸管吸到平皿的培養基中培養﹔培養條件同a。
　　(3)培養基的選用。
　　a.馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基 (PDA)，此种配方是所有虫草菌屬真菌的通用培養基，在分离培養初期可用該配方，不過菌种生長不十分旺盛，而且易老化、退化。
　　b.加富培養基 (1)﹕多性蛋白臍10g，葡萄糖50g，磷酸氫二鉀1g，硫酸鎂0.5g，活蚕蛹30g，生長素0.5μg，瓊脂20g，加水1000mL，pH﹕ 5.0。
　　加富培養基 (Ⅱ)﹕蛋白脯40g，葡萄糖40g，去皮鮮馬鈴薯100g，磷酸氫二鉀1g，硫酸鎂0.5g，牛肉膏10g，生長素0.5μg，蝠蛾活幼虫 (磨碎)30g，瓊脂20g，高寒草甸土浸出液10OOmL，pH﹕5.0。
　　在加富培養基上，菌落比在PDA培養基上生長旺盛和迅速﹔加富 Ⅱ號又优于Ⅰ號。

　　2.生長特性 冬虫夏草菌的分离培養中須掌握溫度、pH值、光照、碳和氮源及無机鹽的利用狀況。
　　(1)不同溫度對菌絲生長的影響。冬虫夏草菌喜偏低溫度。在0 一4℃時能緩慢生長﹔5一8℃時生長速度加快﹔10一19℃是此菌較适生長發育的范圍;最佳生長溫度為15一l9℃。超過20℃菌絲猛長，菌落由白色變為灰黑或棕黃色，開始出現變异，所以不宜高溫培養。
　　(2)對pH值的要求。冬虫夏草菌是一种偏酸性真菌，最适pH值為 5.0一6.0，當pH值為4.5以下和6以上時，隨著增高或降低，生長緩慢至不生長。