第一節  三　類化合物

三　類化合物是靈芝的主要化學成分之一，靈芝中的很多三　類化合物具有生理活性，如ganoderic acid A. B. C.和D能夠抑制小鼠肌肉細胞組胺的釋放。ganoderic acid F有很強的抑制血管緊張素　的活性。赤芝孢子酸A對CCl4和半乳糖胺及丙酸杆菌造成的小鼠轉氮　升高均有降低作用。赤芝孢子內酯A具有降低膽固醇作用。因此對三　類化合物的進一步深入研究將有利于靈芝有效成分的尋找和進一步闡明其生理活性。

1982年Kubota. T等人首次從赤芝子實体中分离得到三　類化合物，此后十年來，對三　類化合物研究最多的是日本，其次是中國（包括台灣）。到目前為止已先后從赤芝子實体和孢子粉中分到了103种新的三　類化學成分

一、三　類化合物提取和分离

靈芝中三　類化合物的提取分离方法可以分為三類，一類是用甲醇或者乙醇提取原料，提取物直接進行層析分离，如H. Konda等用甲醇提取原料，提取物濃縮后懸浮于水，依次用已烷、乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯部分經硅膠色譜、高效液相層析（HPLC）分到四個三　酸。第二類方法是用甲醇、乙醇等提取原料，然后分出總酸部分，進行分离，如Morigiwa等人用70%甲醇提取原料，提取物用1mol/L HCl調pH2~3，再用乙酸乙酯萃取，濃縮后進行分离，分到五個三　類化合物。Nishitoba等人用乙醇提取原料，提取物濃縮后在水和CHCl3中進行分配，CHCl3層濃縮至一定体積后，用飽和的NaHCO3水溶液萃取，萃取物用6mol/L HCl酸化到pH3~4，水溶液中出現的沉淀以CHCl3溶解，干燥后得總酸提取物，經硅膠柱層析分到五個三　類化合物。第三類方法是利用制備衍生物的方法進行分离，如KiKuchi等用乙醚提取原料，其酸性部分用重氮甲烷進行甲基化，然后再在硅膠柱上進行分离，從中分到七個三　酸。Hirotani等用90%MeOH-H2O提取，提取液減壓濃縮后加入5%Na2CO3水溶液鹼化至pH9，然后用CHCl3萃取，水層用4mol/L H2SO4酸化至pH2，再用CHCl3萃取，CHCl3萃取液用水洗，Na2SO4干燥，濃縮后得總酸部分，該部分再以常規方法用重氮甲烷進行甲酯化，硅膠柱色譜，得到三個新的三　酸。

靈芝中三　化合物的分离大多是經過反复硅膠柱層析，較純的部分薄層、低壓柱，高效液相色譜（正反相）制備等方法進行分离純化。硅膠柱色譜一般常用的展開劑為MeOH-CHCl3，EtAc-C6H6，EtoAc-acetone，EtOAc-CHCl3，CHCl3-MeOH-H2O等系統。HPLC多用乙　—乙酸銨緩沖溶液以及MeOH-H2O洗脫。薄層檢查一般使用的展開劑為CHCl3-MeOH（95︰5，9︰1V/V）或苯—乙酸乙酯（3︰7V/V），香蘭醛-硫酸做為薄層斑點的顯色劑。

我們曾從赤芝孢子粉酸性脂溶部分中分到七個三　類化合物，其中五個四環三　酸，一個四環三　醇，二個五環三　內酯化合物，并對它們的結构進行了測定証明有三個新化合物，其余均為首次從赤芝孢子粉中分离出來。下面是三　類化合物提取分离流程。

二、三　類化合物的結构測定

（一）三　類化合物的結构特點

靈芝三　類化合物分為四環三　和五環三　。從靈芝四環三　類化合物的結构來看，屬于高度氧化的羊毛甾烷衍生物。按分子所含碳原子數可分為C30，C27和C24三大類，根据其所含功能團和不同的側鏈可有以下六种基本骨架。

在三　酸的結构中，環上的雙鍵大多位于△8（9）位，在C11位和C23位大部分有羰基，而且在C3、C7、C15位也多被羥基或羰基所取代。在三　醇、醛和過氧化物的結构中環上大多存在兩個不飽和雙鍵，其位置在△7（8），△9（11）位，C11位和C23位也不存在羰基而且環上的取代基明顯減少。表6-1列出了迄今為止分到的所有靈芝三　化合物。目前靈芝三　化合物的命名有些混亂，同一化合物有不同的名稱，對此我們采用最早的命名。

（二）三　類化合物的光譜特征

1.紅外光譜:靈芝中的三　類化合物大多都有羥基,因而在3300cm-1，1050cm-1有強的羥基吸收峰。三　酸類化合物在2600∼2400cm-1有弱吸收峰，當羧酸被酯化以后這一吸收峰消失。在C15位有羰基的化合物在1740∼1760cm-1會出現五元環酮的吸收特征峰。在1720cm-1（酯），1710cm-1（六元環酮），1650cm-1（α、β不飽和酮）也有較強的吸收峰。

2.紫外光譜﹕由于靈芝中的三　類化合物大多都有共軛体系存在，因而紫外吸收波長和強度也很有規律，凡在C11位存在羰基的化合物都存在著△8（9）雙鍵，這類化合物的紫外吸收大多在λmax253nm，logε在3.8∼4.1之間，而C11位沒有羰基的化合物，大多存在著△7（8）、△9（11）共軛雙鍵，因而紫外吸收在λmax237nm，244nm，253nm有三個吸收峰，而吸收強度大多在logε3.7∼4.1之間。而在既沒有α、β不飽和酮，又沒有共軛雙鍵的化合物中，紫外光譜僅表現簡單的雙鍵末端吸收在λmax210nm logε4.2左右。

3.質譜﹕四環三　化合物質譜裂解的共同特征是失去側鍵。羊毛甾烷類的特征裂解是從D環斷裂，伴有一個質子的轉移，然后經第二次裂解失去側鏈和D環的一部分。Kikuchi[11] 在這方面作了很多研究，總結出這類化合物的裂解方式大致如下﹕

4.核磁共振譜﹕三　類化合物的1HNMR中主要信號是雙鍵質子，連氧碳質子和甲基質子（見表6-2）。環內雙鍵質子的δ值一般大于5×10-6，在靈芝三　化合物中，如ganoderic acid R. S. T. X. Y. Me等的雙鍵位置在△7（8）和△9（11），7位質子的δ值在（5.48∼5.86)×10-6之間,11位質子的δ值比7位要處于高場,在δ(5.31∼5.39）×10-6之間，側鏈上雙鍵的位置可分為二類，一類在△20（22），20位質子的信號在δ（6.04∼6.12)×10-6，如ganoderenic acid A.B.C.D等。另一類在△24（25），24位質子的信號在δ（5.4∼5.7）×10-6，如ganoderol A和B。

連氧碳質子由于位置、環境和构型的不同，其化學位移變化較大。在C3、C7、C12、C15為羥基取代的化合物中由于羥基构型不同，該碳所連接H的化學位移值和偶合常數也不同，3—H多為α构型，δ值在(3.22∼3.31)×10-6，J=10Hz，7—H為α构型時δ﹕（4.75∼4.85)×10-6，J=9Hz，7—H為β构型時，δ﹕（4.4∼4.5)×10-6，J=5Hz。12—H多為α构型，δ﹕（4.5∼4.9)×10-6。15—H多為β构型，δ（4.2∼4.90)×10-6。三　中的甲基信號上有較多的取代基，對甲基的化學位移影響較大。18—CH3通常在δ（0.95∼1.0)×10-6之間，當分子中存在△7（8）、△9（11）共軛雙鍵時，該甲基信號向高場位移至δ（0.55∼0.60)×10-6，當12位有羥基取代時，該信號出現在δ0.85×10-6左右。21—CH3信號通常出現在δ（0.85∼1.0）×10-6之間，為雙峰，但當20位有羥基取代時，該信號向低場位移，出現在δ（1.4∼1.6）×10-6，當存在△20（22）雙鍵時，該信號出現在δ2.1×10-6，且都為單峰。27—CH3通常出現在δ（1.1∼1.2）×10-6，當存在△24（25）雙鍵時，該甲基信號在δ1.6×10-6左右。32—CH3受7位和15位取代基的影響較大。當7位和15位同時被羰基取代時，該號在δ（1.6∼1.8）×10-6之間，當7位和15位均為羥基或一個羥基一個羰基時則無明顯變化均出現在δ（1.2∼1.3）×10-6之間，當7位和15位無取代基時，該甲基信號則出現在δ0.88×10-6左右。30—CH3和31—CH3受3位取代基影響較大，當3位是羥基時30—CH3在δ1.0×10-6左右，31—CH3在δ0.85×10-6左右。當3位是羰基時，17—H在δ1.8×10-6左右，而當15位是羰基時17—H向低場移至δ2.2×10-6左右。從17—H的位置可以判斷C15位所連接的基團。

  13CNMR的運用使得化合物基本骨架的确定日趨准确。三　化合物的碳譜中最容易分辨的信號來自雙鍵碳原子和連氧碳原子。前面提過靈芝三　母核上的雙鍵位置有兩類，在△8（9）這類化合物中，C8在δ（151∼160）×10-6，C9在δ（140∼146）×10-6，在△7（8）和△9（11）這類化合物中C7在δ（120∼121）×10-6，C8在δ（140∼142）×10-6，C9在δ（141∼145）×10-6，C11在δ（115∼117）×10-6。側鏈上的雙鍵位置也有兩類，一類是△20（22），C20在δ（154∼157）×10-6，C22在δ（124.3∼124.7）×10-6﹔另一類是△24（25），C24在δ（139∼145）×10-6，C25在δ（126∼129）×10-6。當下列各碳連有羥基時，它們的化學位移值分別為C3δ（77∼79）×10-6，C7δ（66∼68）×10-6，C12δ（77∼79）×10-6，C15δ（72∼74）×10-6。當下列各碳連有羰基時，它們的化學位移值分別為C3δ（215∼216）×10-6，C7δ（198∼200）×10-6，C15δ（205∼217）×10-6，C23δ（207∼208）×10-6。羧酸酯的化學位移在δ（170∼178）×10-6。C3、C7、C15取代基不同時，C1在δ（35∼37）×10-6，C2在δ（34.1∼34.8）×10-6，C4在δ（46∼47）×10-6，當C3連接的是羥基時，這三個碳的信號均向高場位移，C1在δ34×10-6，C2δ27×10-6，C4δ38×10-6左右。C7是羰基取代時C6在δ（33∼37）×10-6，C7是羥基取代時C6在δ（26∼28）×10-6。C15是羰基時C14在δ（57∼59）×10-6，C15是羥基時，C14在δ（52∼53）×10-6。