Mizuno等(1982)經熱水提取,乙醇分部沉淀,并經离子交換色譜,pH依賴的Cetavlon處理、凝膠過濾以及Con A-Sepharose GL-4B親和色譜等純化,從人工培養的平蓋靈芝菌絲体中得到一個多糖組分。進一步通過甲基化、核磁共振、過碘酸氧化、Smith降解和β-D-葡聚糖 (β-D-glucanase)分解等技術研究多糖的化學結构。α-葡聚糖組分具有α(1→4)葡萄糖 主鏈,主鏈上每9∼12個殘基連接α(1→6)支鏈,該組分僅有微弱抗腫瘤活性。β-葡聚糖組分具有β(1→3)葡萄糖 主鏈,主鏈上每12個殘基通過β(1→6)連接一個單糖 支鏈。其中之一顯示顯著的抗小鼠S180活性,50%抑瘤劑量為0.74mg/kg。
Mizuno和Miyasaki等分別從赤芝、平蓋靈芝和紫芝加哥提取出具有抗腫瘤活性的多糖。并确証其基本化學結构。
就抗腫瘤活性而言,靈芝多糖并無种間差异,它們和從其他真菌中所獲多糖一樣,具有以下三個特性﹕
1.初級結构的分子量在3×105以上。
2.多聚物的連接方式均有β-1-3-D-殘基的主鏈和β-1-6-D-葡萄糖側鏈殘基。但從不同真菌提取的多糖的β-1-6-D-葡萄糖的分支程度不等,靈芝多糖的主鏈殘基与側鏈殘基的比例為5︰2,即每個主鏈殘基環繞2個β-1-6-D-葡萄糖殘基。無1-6β側鏈的1-3-β葡聚糖未見抗腫瘤活性。
3.多糖的三維螺旋結构參与其抗腫瘤活性,此結构遭破坏則影響其活性。
第三節 靈芝的其他化學成分
靈芝除了含有多糖和三 類化學成分以外,還含有核 類、甾醇類、生物鹼類、氨基酸多 類和 喃衍生物等化學成分。
一、核 類
核 類是具有廣泛生理活性的一類水溶性成分,余競光等從薄蓋靈芝菌絲体中分离得到五种核 類化學成分,其中靈芝嘌呤是新化合物。Shimiz等人從赤芝子實体中也得到四种核 類化合物。靈芝中核 類化合物的提取方法一般是將靈芝菌絲体乙醇提取物濃縮后溶于水,依次以乙醚、乙酸乙酯萃取,萃 取后的水溶液通過陽离子樹脂處理,流出的溶液及水洗液通過大孔樹脂色譜,得到尿嘧啶核 、尿嘧啶。交換后的陽离子樹脂用NH4OH處理,依次用乙醇、水洗脫。95%乙醇洗脫部分經硅膠柱色譜及制備薄層色譜得到腺嘌呤、腺嘌呤核 和靈芝嘌呤等。這几种核 類的結构如下﹕
由赤芝孢子粉和薄蓋靈芝菌絲体制成的增肌注射液在臨床上廣泛應用于進行性肌營養不良,萎縮性肌強直等疾病的治療,并有較好的療效。動物實驗証明尿嘧啶和尿嘧啶核 對實驗性肌強直症小鼠血清醛縮 有降低作用。SHimizu等人發現腺嘌呤核 有很強的抑制血小板凝集血小板凝聚的作用和鎮靜、抗缺氧及促進心肌組織攝取86Rb的作用。
二、甾醇類
靈芝中甾醇含量比較高,僅麥角甾醇含量就達千分之三左右。已知從靈芝中分到的甾醇有近二十种,其骨架分為麥角甾醇類和膽甾醇類兩种類型,甾醇類化合物有麥角甾醇(ergosterol),麥角甾醇棕櫚酸酯(ergosta-palmitate)﹔麥角甾-7,22-二烯-3-酮(ergosta-7,22-dien-3-one)﹔羊毛甾-7,9(11),24-三烯-3β,21-二醇(lanosta-7,9(11),24-trien-3β,21-diol)﹔麥角甾-7,22-二烯-3β-醇(ergosta-7,22-dien-3β-ol)﹔5α-豆甾烷-3.6-二酮(5α-stigrmastan-3.6-dione)﹔β-谷甾醇(β-sitosterol)﹔24-甲基膽甾-7-烯-3β-醇[(24s)-24-methyl-5α-cholest-7-en-3β-ol]﹔麥角甾4.6,8(14),22-四烯-3酮(ergos-ta-4,6,8(14),22-tetra-en-3-one);24(s)-24—甲基5α-膽甾-7,16-二烯-3β-醇,[(24s)-24-methyl-5α-cholest-7,16-dien-3β-ol]﹔异麥角甾酮(iso-ergosteion)﹔以及麥角甾醇過氧化物(ergosterol peroxide),ergosta-7,22-dien-3β-yl linoleate,5α,8α-epidioxyergosta-6,22-dien-3β-yl lionleate,ergosta-7,22-dien-2β,3α,9α-triol等。
甾醇類化合物的提取分离多以乙醇提取原料,然后用乙醚萃取,再用NaHCO3水溶液萃取乙醚溶液,除去酸性部分,然后用硅膠柱層析分离甾醇類化合物,甾醇類化合物的生理活性報道很少。
三、生物鹼類
靈芝中的生物鹼含量比較低,僅從野生靈芝、赤芝孢子粉、薄蓋靈芝中分到過生物鹼,有膽鹼(choline)﹔甜菜鹼(betains)及其鹽酸鹽γ-三甲胺基丁酸(γ-butyrobetaine),靈芝鹼甲(ganoine,I),靈芝鹼乙(ganodine,II)。
靈芝生物鹼的分离一般是用乙醇和水相繼提取,提取物經乙醚脫脂,水溶部分采用雷氏鹽沉淀法或樹脂法得到含氮部分,再經薄層色譜和制備薄層色譜得到單体生物鹼。
靈芝中生物鹼雖然含量較低,但有些具有一定的生物活性,γ-三甲胺基丁酸在窒息性缺氧模型中有提高存活時間的作用,以及能使离体豚鼠心臟冠脈流量增加。甜菜鹼臨床上將其和N- 基甘氨酸(glycocyamine)共用以治療肌無力[18]。
四、 喃衍生物
靈芝中的 喃衍生物類是從發酵的薄蓋靈芝菌絲体乙醇提取物乙酸乙酯溶解部分經硅膠柱色譜得到的,有以下几种化合物,并未見生理活性的報道。
1.R=CH2OH(5-羥甲基 喃甲醛) 1,1′=α-糠醛基二甲醚
2.R=CH2OCOCH3(5-乙 氧甲基 喃甲醛)
3.R=CH2OC4H9(5-丁氧甲基 喃甲醛)
五、氨基酸多 類
靈芝中的氨基酸有天門冬氮酸、谷氨酸、精氨酸、賴氨酸、鳥氨酸、脯氨酸、丙氨酸、甘氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、纈氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、γ-丁基氨酸等,并發現有含硫氨基酸,其結构經X-衍射分析确定為硫組氨酸甲基內銨鹽。其結构如下﹕
實驗証明天門冬氨酸、谷氨酸、γ-氨基丁酸、酪氨酸、精氨酸、賴氨酸、亮氨酸、丙氨酸等可以提高小鼠窒息性缺氧的存活時間。
從靈芝中還分到多 類化合物,其中有兩种中性多 ,一种水解后鑒定含有亮氨酸、酪氨酸、纈氨酸、脯氨到、丙氨酸、精氨酸、天門冬氨酸、甘氨酸等八种氨基酸﹔另一种多 可使小鼠窒息性缺氧的存活時間由21min50s提高到45min47s。水解后鑒定含有苯丙氨酸、酪氨酸、脯氨酸、丙氨酸、甘氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、天門冬氨酸等。分离到的酸性多 經水解得到十一种氨基酸,鹼性多 經水解得到四种氨基酸,初步确定氨基酸排列次序是鳥氨酸—甘氨酸—脯氨酸—脯四 。
氨基酸的分离采用色譜、電泳雙向色譜等方法,与已知品對照, 三酮顯色,進行鑒定,近年來儀器的發展使得氨基酸分析更現代化,用氨基酸分析儀即可得到各种氨基酸的數量和含量。 的鑒別是靠高壓電泳及雙向色譜方法。
六、無机元素
靈芝中含有多种微量元素,有Mn,mg,Ca,Cu,Ce,Sr,Ba,Zn,Fe,P,B,Cr,Ni,V,Ti等,靈芝的鍺(Ge)含量与一般植物相似,但它對鍺的富集能力比較強,很多研究者將無机鍺加入靈芝培養基(液)中以得到較高含量的有机鍺。鍺并非靈芝的主要有效成分。
七、其他
從靈芝中還得到一些脂肪酸、長鏈烷烴等,有苯甲酸、硬脂酸、棕櫚酸、十九烷酸、廿二烷酸、廿四烷酸、卅一烷、廿四烷,還有甘露醇、海藻糖、煙酸等。
關于靈芝及其制劑的質量控制問題。
靈芝及其制劑在臨床上應用比較多,其質量控制問題一直是許多生產厂家和科研工作者研究的課題,但在這方面的報道并不多,根据我們多年對靈芝的研究的經驗,認為應以多糖和三 的含量做為栽培和野生靈芝的質量控制標准,這是因為靈芝含有較多的多糖,而且這些多糖大多具有提高免疫功能的作用,這与靈芝滋補強壯、扶正固本的作用是一致的。靈芝中含量比較高的另一類成分是三 ,而且一些三 化合物已在几個方面表現比較強的生理活性,因此三 含量的測定可以作為靈芝的質量控制標准之一。
第五章 靈芝的藥理作用
采用現代科學技術与方法研究靈芝的藥理作用,闡明其作用机制,具有重大意義。一方面它可為臨床應用靈芝防治疾病奠定理論基礎,有助于提高療效和擴大其應用范圍﹔另一方面為靈芝類新藥和保健品開發提供科學資料,有助于确保新藥質量,使之安全、有效。此外,靈芝的藥理研究還為中西醫結合的理論研究提供了新的資料。近二十年來國內外的大量研究結果証明,靈芝具有廣泛的藥理作用,且毒性极低。這与中醫藥學和現代醫學對靈芝的療效和毒副作用的認識是一致的。