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我們發現，灌胃松杉樹芝多糖（50∼200mg/kg）可顯著增強二硝基氯苯（DNCB）所致小鼠遲發型皮膚過敏反應（DCH），拮抗環磷 胺對DCH的抑制作用。每日強迫小鼠在冷水中游泳5min，共10d，即出現明顯的應激性免疫功能抑制，DCH反應可降低50%左右。在應激同時，每日灌胃松杉樹芝多糖（50mg/kg，100mg/kg）可使DCH反應維持在接近正常的水平。表明松杉樹芝多糖可拮抗應激所致細胞免疫功能抑制。從松杉樹芝菌絲体和發酵液中所獲多糖亦有類似的增強細胞免疫效應作用。
我們還証明，靈芝多糖BN3A，BN3B和BN3C（1μg/ml，5μg/ml）均可顯著促進刀豆素A（ConA）誘導的C57BL/6j小鼠的脾淋巴細胞增殖反應。在濃度為30μg/ml時，BN3A和BN3C還可部分拮抗氫化可的松對淋巴細胞增殖反應的抑制作用。我們還發現，与3月齡小鼠相比，14月齡小鼠的ConA誘導的淋巴細胞增殖反應降低26.5%，此三种多糖在濃度為1和2.5μg/ml時，均可使之顯著恢复。最近，我們以同种异型抗原刺激的混合淋巴細胞培養反應（MLR）為模型，觀察靈芝多糖GL—B對細胞免疫功能的影響。結果証明，GL—B（50∼800μg/ml）可濃度依賴性的促進小鼠的MLR，并可反轉小劑量環孢霉素A（0.01μg/ml)對MLR的抑制作用，并使之恢复正常。當環孢霉素A的濃度增至0.1∼1μg/ml時，對MLR的抑制作用達80%，對此GL—B几無拮抗作用。GL—B亦可部分拮抗氫化可的松對MLR的抑制作用。抗腫瘤藥氟尿嘧啶、絲裂霉素C和阿糖胞 均可明顯抑制MLR，GL—B可劑量依賴性地拮抗這些藥物對MLR的抑制作用（表7-3）。同樣，我們亦發現，24月齡小鼠的MLR較3月齡小鼠降低35.3%，GL—B可使之恢复（表7-4）。
表7-3 靈芝多糖GL—B對絲裂霉素C、氟尿嘧啶和阿糖胞
所致混合淋巴細胞反應（MLR）抑制的恢复作用
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組別 |
藥物濃度（μg/ml） |
[3H]TdR攝取（dpm） |
|
對照 |
- |
31361±4242 |
|
絲裂霉素C（抑制對照） |
0.01 |
16842±1266+++ |
|
絲裂霉素C+GL-B |
0.01+50 |
19003±978** |
|
絲裂霉素C+GL-B |
0.01+100 |
24209±1505*** |
|
絲裂霉素C+GL-B |
0.01+200 |
27606±2372*** |
|
對照 |
- |
28946±1527 |
|
5-氟尿嘧啶（抑制對照） |
0.1 |
16250±1614+++ |
|
5-氟尿嘧啶+GL-B |
0.1+50 |
20875±1750*** |
|
5-氟尿嘧啶+GL-B |
0.1+100 |
26201±2130*** |
|
5-氟尿嘧啶+GL-B |
0.1+200 |
28823±1728*** |
|
對照 |
- |
23678±1348 |
|
阿糖胞 （抑制對照） |
0.01 |
13092±1973+++ |
|
阿糖胞 +GL-B |
0.01+50 |
17658±2420** |
|
阿糖胞 +GL-B |
0.01+100 |
24380±2949*** |
|
阿糖胞 +GL-B |
0.01+200 |
30030±4649*** |
x - ±s,n=6,+++P<0.001与對照比較, **P<0.01,***P<0.001与抑制對照比較。
表7-4 靈芝多糖GL—B對24月齡老年小鼠的同种
异型抗原刺激的混合淋巴細胞反應（MLR）的影響
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組別 |
鼠齡（月） |
濃度（μg/ml） |
[3H]TdR攝取×10-3（dpm） |
|
年輕對照 |
3 |
- |
45.4±2.1 |
|
老年對照 |
24 |
- |
19.4±3.8+++ |
|
GL-B |
24 |
50 |
34.8±4.5 |
|
GL-B |
24 |
100 |
36.1±2.6*** |
|
GL-B |
24 |
200 |
40.2±4.2*** |
x - ±s,n=6,+++P<0.001与年輕對照比較,**P<0.01,***P<0.001与老年對照比較。
我們還采用抗L3T4及抗Lyt2單克隆抗体和間接熒光免疫法檢測了混合淋巴細胞培養中T細胞亞類的數量。結果指出，GL—B（50∼200μg/ml）可顯著增加其中總T細胞的回收量以及L3T4+細胞和Lyt2+細胞的回收量，Lyt2+細胞的百分比亦明顯增加。空斑減少試驗還顯示，GL—B可顯著增強細胞毒T細胞（CTL）的功能，在濃度為200μg/ml時，其殺傷活性增加100%。小鼠L3T4+細胞屬于T輔助細胞（Th），這一結果說明，GL—B能促使Th細胞增殖。而T抑制細胞（Ts）和CTL均帶有Lyt2+抗原，故GL—B促進Lyt2+細胞增殖的确切含義尚待研究，但由于我們又觀察到GL—B可增強CTL的殺傷活性，表明GL—B增加的Lyt2+細胞中，至少有一部分屬于CTL細胞。
体外試驗亦証明，樹舌多糖可增強ConA刺激的小鼠脾細胞增殖反應。薄芝液對ConA刺激的脾細胞增殖反應的影響視所用濃度而异，低濃度（1.5μg/ml）時有促進作用，高濃度（25μg/ml）則抑制之。
靈芝蛋白LZ—8在体外對小鼠脾細胞有強大的促有絲分裂作用，最适刺激濃度為3.3μg/ml。LZ—8尚可增強ConA和LPS的促有絲分裂作用。
四、促進免疫細胞因子的產生
我們發現，靈芝多糖BN3A，BN3B和BN3C（0.05∼1μg/ml）均可顯著增加C57BL/6j小鼠脾細胞在ConA存在條件下的IL—2產生，并可部分地拮抗環孢霉素A和氫化可的松對小鼠脾細胞產生IL—2的抑制作用。与3月齡小鼠比較，19月齡小鼠脾細胞IL—2產生減少17.6%∼20.3%，此三种多糖均可使之恢复至3月齡小鼠的正常水平。
在混合淋巴細胞培養中，T輔助細胞（Th）受到同种异型抗原刺激后，在巨噬細胞分泌的IL—1協同下，發生增殖反應并合成分泌IL—2。在反應体系中加入終濃度為200μg/ml的GL—B，其作用呈雙向反應。即在培養的前24h，GL—B可促進脾細胞合成分泌IL—2，24h以后則逐漸減少合成分泌IL—2。當固定培養時間為12h，改變GL—B的濃度，則可見GL—B呈濃度依賴性地促進脾細胞合成分泌IL—2（表7-5）。由于GL—B對IL—2依賴株HT2細胞以及同种异型抗原或ConA活化的脾細胞均無促增殖作用，故我們認為GL—B不能促進活化細胞的IL—2受体表達。
表7-5 靈芝多糖GL—B對小鼠混合淋巴細胞培養上清液
中白細胞介素質2（IL—2）活性的影響
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組別 |
濃度（μg/ml） |
IL-2活性（dpm） |
|
對照 |
- |
2044±167 |
|
GL-B |
25 |
2386±208* |
|
GL-B |
50 |
2930±125*** |
|
GL-B |
100 |
3044±192*** |
|
GL-B |
200 |
3607±339*** |
x - ±s,n=6,*P<0.05, ***P<0.001与對照比較。
最近，我們証實，未純化的小鼠脾細胞在体外培養時可發生自發性增殖，即自身混合淋巴細胞培養反應（A MLR），GL—B亦可顯著促進這种反應。而更為有意義的是，24月齡老年小鼠的未純化脾細胞的自發性增殖和IL—2分泌均較3月齡年輕小鼠顯著減少，而GL—B則可劑量依賴性地使之逐漸恢复（表7-6）。
表7-6 靈芝多糖GL—B對老年小鼠脾細胞自發增殖和
白細胞介素質2（IL—2）產生的影響
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組別 |
鼠齡
（月） |
濃度
（μg/ml） |
[3H]TdR攝取×10-3
（dpm） |
IL-2活性×10-3
（dpm） |
|
年輕對照 |
3 |
- |
24.8±4.7 |
8.3±1.4 |
|
老年對照 |
24 |
- |
18.0±3.4+ |
5.8±1.0+ |
|
GL-B |
24 |
50 |
22.1±2.7* |
7.3±1.2* |
|
GL-B |
24 |
100 |
24.9±3.8** |
8.2±1.0** |
|
GL-B |
24 |
200 |
26.4±2.4*** |
9.0±1.0*** |
x - ±s,n=6,+P<0.001与年輕對照比較,*P<0.05，**P<0.01,***P<0.001与老年對照比較。
我們還發現，GL—B与小鼠腹腔滲出細胞（主要為巨噬細胞）共同培養24h后，上清液和腹腔滲出細胞內IL—1明顯增加，說明GL—B可促進腹腔滲出細胞合成和分泌IL—1（表7-7）。
表7-7 靈芝多糖GL—B對小鼠腹腔滲出細胞合成和分泌
白細胞介素質1（IL—1）的影響
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組別 |
濃度
（μg/ml） |
IL-1活性（dpm） |
|
上清液 |
細胞內 |
|
對照 |
- |
9328±752 |
17805±1893 |
|
GL-B |
50 |
12290±1176*** |
18641±2042 |
|
GL-B |
100 |
15046±1645*** |
20908±2122* |
|
GL-B |
200 |
16759±2786*** |
23218±1530*** |
|
